TB-500: estructura, analítica y manipulación en la investigación

Visión general: qué hay detrás del nombre TB-500

TB-500 es un nombre de catálogo y comercial, no una DCI ni una denominación sistemática. «TB» remite a la timosina beta 4, la proteína de la que procede la secuencia. El número 500, en cambio, no es un dato químico: no describe ni la longitud de la cadena ni la masa. En el catálogo, la molécula aparece dos veces: como producto individual TB-500 con 5 mg y como componente del blend BPC-157 + TB500 con 10 mg en total. Lo vinculante para la identidad no son los nombres, sino la secuencia, la fórmula molecular y la masa medida en el certificado.

Estructura en detalle

La notación abreviada Ac-LKKTETQ se lee del extremo N-terminal al C-terminal. «Ac» designa un grupo acetilo (CH₃CO–) unido covalentemente al grupo amino del primer residuo. Siguen leucina (L), dos veces lisina (K), treonina (T), ácido glutámico (E), de nuevo treonina y glutamina (Q); E y Q se confunden con facilidad.

La fórmula molecular es C38H68N10O14; la masa molar media, de unos 889,0 g/mol, y la masa monoisotópica, de 888,49 Da. Todos los residuos se presentan en forma L; con los dos estereocentros de cada treonina resultan nueve estereocentros. El péptido es lineal, sin puente disulfuro y no está ciclado.

Desde el punto de vista químico, los dos extremos son relevantes. La acetilación sustituye el grupo amino libre, con carga positiva, por un enlace amida neutro. El inicio de la cadena se asemeja así al enlace peptídico que existe en ese punto dentro de la proteína y resulta más difícil de atacar para las aminopeptidasas. El extremo C-terminal no está amidado; una variante amidada sería solo unos 0,98 Da más ligera y únicamente podría distinguirse con seguridad mediante medición de alta resolución. A pH neutro, a las dos cadenas laterales de lisina protonadas se oponen dos cargas negativas: la cadena lateral del glutamato y el grupo carboxilo C-terminal.

Diferenciación frente a moléculas afines

• TB-500 (Ac-LKKTETQ-OH): 7 aminoácidos, C38H68N10O14, unos 889 g/mol, CAS 885340-08-9.
• LKKTETQ sin grupo acetilo: C36H66N10O13, unos 847 g/mol; 42 Da más ligero y posible componente secundario de la síntesis.
• Timosina β4: la proteína completa, con 43 residuos y una masa molar de unos 4963 g/mol (CAS 77591-33-4); LKKTETQ ocupa en ella las posiciones 17 a 23.
• Ac-SDKP: tetrapéptido acetilado del extremo N-terminal de la misma proteína, C20H33N5O9, unos 488 g/mol; sin solapamiento de secuencia con TB-500.
• BPC-157: 15 aminoácidos, unos 1419,5 g/mol, extremos sin modificar; sin parentesco con la timosina β4.

Qué revisar en la analítica y el COA

Compruebe primero qué masa indica un certificado: los equipos de alta resolución miden la monoisotópica, y las tablas de resumen suelen dar la media. En el espectro de electrospray del heptapéptido cabe esperar típicamente:

• [M+H]⁺ a m/z 889,50
• [M+2H]²⁺ a m/z 445,25; las dos lisinas favorecen la doble protonación
• aductos de sodio y de potasio a m/z 911,48 y 927,45

Precaución con las señales aisladas: la timosina β4 completa aparece como una serie de iones con carga múltiple, por ejemplo en torno a m/z 994 (cinco cargas) u 828 (seis cargas), es decir, en el mismo rango. Solo la masa deconvolucionada es concluyente. Son componentes secundarios típicos las secuencias de deleción a las que les falta un aminoácido (por ejemplo, menos 128 Da sin una lisina o menos 101 Da sin una treonina), el péptido no acetilado (menos 42 Da) y la glutamina desamidada. La desamidación desplaza la masa solo +0,98 Da, casi en coincidencia con la primera señal isotópica; se reconoce en alta resolución o como pico propio en el cromatograma. Los epímeros, es decir, moléculas con un aminoácido en forma D, tienen la misma masa y solo pueden separarse por cromatografía.

TB-500 no contiene ningún aminoácido aromático. Por ello, en la HPLC se detecta a través de los enlaces peptídicos en el UV de onda corta, entre 214 y 220 nm; a 280 nm apenas da señal. Además, la pureza en porcentaje de área debe distinguirse del contenido neto de péptido. Tras la purificación, las cadenas laterales básicas de lisina se presentan en forma de sal, casi siempre con trifluoroacetato (TFA) o acetato como contraión. Con dos iones TFA por molécula, por cálculo solo alrededor del 80 % de la masa de la sal correspondería al péptido; con dos iones acetato, alrededor del 88 %, sin contar el agua residual. No deben confundirse: el grupo acetilo está unido covalentemente y forma parte de la fórmula molecular, mientras que el contraión acetato es solo un componente de la sal. Más información en la guía Pureza de los péptidos de investigación.

TB-500 se analiza periódicamente en un laboratorio externo mediante HPLC y espectrometría de masas. Los certificados de análisis (COA) disponibles están en el área de laboratorio; si falta un certificado, el análisis figura allí como «pendiente». Los métodos de medición se explican en la guía HPLC y espectrometría de masas, y la lectura de un certificado, en la guía Leer correctamente un certificado de análisis.

Almacenamiento y manipulación en el laboratorio

El liofilizado se almacena seco, protegido de la luz y en frío; durante periodos prolongados, a −20 °C o menos. Lo específico de esta molécula: sin metionina, cisteína ni triptófano faltan los puntos clásicos de oxidación, y sin asparagina ni aspartato, también las posiciones especialmente propensas a la desamidación y la isomerización. El punto más sensible es la glutamina; la formación de piroglutamato, como ocurre con la glutamina N-terminal, queda descartada, ya que se encuentra en el extremo C-terminal. El factor más importante sigue siendo la humedad, pues las sales peptídicas con acetato o TFA absorben agua; por eso, los viales fríos deben abrirse solo una vez alcanzada la temperatura ambiente. En disolución, la desamidación y la hidrólisis avanzan mucho más deprisa que en el sólido. La guía Almacenar péptidos liofilizados ofrece más información.

Contexto de investigación

En biología estructural, LKKTETQ se considera el motivo central de unión a actina de la timosina β4. El fragmento sintético permite estudiar este segmento de forma aislada, por ejemplo en trabajos in vitro sobre la interacción con la G-actina y la organización del citoesqueleto, así como en modelos preclínicos de migración celular. Ello no implica ninguna afirmación sobre efectos en seres humanos ni en animales.

Solo para investigación: aviso legal

GPeptides suministra TB-500 exclusivamente como reactivo de laboratorio para la investigación in vitro. No está destinado a su aplicación sobre el cuerpo humano o animal ni en su interior, y no es un medicamento. GPeptides no facilita información sobre su aplicación ni sobre sus efectos; la analítica acredita la identidad y la pureza del reactivo, nada más. El precio y la disponibilidad figuran en las páginas de producto TB-500 y BPC-157 + TB500, y otros fragmentos, en la categoría Fragmentos peptídicos.