Tesamorelin: estructura, analítica y manipulación en la investigación

Visión general y denominación

Tesamorelin es la denominación común internacional (DCI) de un péptido sintético derivado de la hormona liberadora de la hormona del crecimiento humana. La hormona de partida se denomina también GRF o somatoliberina. En relación con Tesamorelin encontrará sobre todo estos nombres:

• Tesamorelin: DCI del péptido sin contraión y nombre de catálogo en GPeptides; se suministra liofilizado en un vial con una cantidad pesada de 10 mg.
• Acetato de Tesamorelin: forma salina con acetato como contraión.
• TH9507 o TH-9507: código de investigación antiguo que aparece como sinónimo en entradas de bases de datos.
• N-[(3E)-hex-3-enoyl]-hGHRH(1-44)-NH2: notación sistemática con el grupo acilo, la secuencia de partida y la amida C-terminal.

La terminación de DCI «-relin» remite al entorno de las hormonas liberadoras hipofisarias, pero no revela nada sobre la familia de receptores: Ipamorelin también la lleva, aunque pertenece a otra clase de péptidos.

Estructura en detalle

El esqueleto consta de 44 L-aminoácidos, exactamente en el orden de la hormona humana. Todas las modificaciones se concentran en los dos extremos de la cadena:

• Extremo N-terminal: el grupo α-amino de la tirosina 1 está unido mediante un enlace amida a un resto trans-3-hexenoílo, un grupo acilo C6 con un doble enlace de configuración E entre C3 y C4. Por tanto, la molécula carece del grupo amino libre y protonable al inicio de la cadena.
• Fundamento de la acilación: la GHRH sin modificar es sustrato de la proteasa dipeptidil peptidasa 4 (DPP-4), que escinde entre la alanina 2 y el ácido aspártico 3. El grupo acilo se describe como protección frente a esta escisión; afecta a la estabilidad enzimática, no a la secuencia.
• Extremo C-terminal: la leucina final lleva, como en la hormona natural, un grupo carboxamida neutro en lugar de un grupo carboxilo.
• Lo que no tiene: Tesamorelin no contiene D-aminoácidos ni presenta ciclación, puente disulfuro o lipidación de cadena larga. Los residuos básicos son seis argininas y dos lisinas; los ácidos, dos residuos de ácido aspártico y dos de ácido glutámico.

Diferenciación respecto a moléculas afines

Los péptidos del entorno del eje de la GH difieren en la longitud de la cadena, el tipo de modificación y el receptor diana:

• hGHRH(1-44)-NH2: secuencia de referencia natural de 44 residuos, sin grupo acilo; unos 5040 Da.
• Tesamorelin: los mismos 44 residuos más trans-3-hexenoílo en el extremo N-terminal; C221H366N72O67S, unos 5136 Da; receptor de GHRH.
• hGRF(1-29)-NH2: fragmento acortado a los primeros 29 residuos, por lo demás sin modificar; unos 3358 Da.
• CJC-1295 (No DAC): también 29 residuos, pero con cuatro sustituciones, entre ellas D-alanina en la posición 2 y leucina en lugar de metionina en la posición 27; unos 3368 Da; receptor de GHRH.
• Ipamorelin: pentapéptido con componentes no proteinogénicos, unos 712 Da; receptor de grelina (GHS-R1a) en lugar del receptor de GHRH.

Desde el punto de vista analítico, la masa es el criterio que separa con mayor nitidez: entre Tesamorelin y los análogos de 29 residuos hay unos 1770 Da, y entre Tesamorelin y la secuencia no acilada, los aproximadamente 96 Da del resto acilo.

Qué tener en cuenta en la analítica y el COA

Tesamorelin se analiza con regularidad de forma externa mediante HPLC y espectrometría de masas. Al leer un certificado, resultan útiles los siguientes valores de referencia específicos de la molécula:

1. Masa esperada: unos 5135,9 Da como valor medio y 5132,7 Da como masa monoisotópica. Con ionización por electrospray aparecen varios estados de carga a la vez; según el cálculo (referido a la masa media), [M+4H]4+ en m/z ≈ 1285,0, [M+5H]5+ en 1028,2 y [M+6H]6+ en 857,0. Con unos 5 kDa, la señal monoisotópica no es la más intensa de la distribución isotópica; por ello, las desviaciones de 1 Da requieren una medición de alta resolución.
2. Aductos: los aductos de sodio y de potasio desplazan la masa deconvolucionada en aproximadamente +22 y +38 Da, respectivamente. Por lo general son un efecto de la ionización y no un subproducto propiamente dicho.
3. Formas secundarias típicas: el sulfóxido de la metionina 27 (+16 Da; en el cromatograma de fase inversa suele eluir algo antes), la forma sin grupo acilo (−96 Da, equivalente a la secuencia sin modificar), secuencias erróneas procedentes de la síntesis (por ejemplo, −113 Da por la falta de una leucina o isoleucina y −156 Da por la falta de una arginina), así como la desamidación en la asparagina 8 o 35 (aproximadamente +1 Da). Los isómeros de masa idéntica no se detectan en un espectro de masas simple; aquí decide la capacidad de separación de la HPLC.
4. Contraiones: de la síntesis y la purificación procede con frecuencia trifluoroacetato (TFA); tras un intercambio de sal, el péptido se presenta como acetato. Si estuvieran ocupadas las ocho cadenas laterales básicas, según el cálculo corresponderían unos 480 Da al acetato o unos 910 Da al TFA.
5. La pureza no es el contenido de péptido: la pureza por HPLC es la proporción de área del pico principal en el cromatograma UV y no recoge ni los contraiones ni el agua residual. El contenido neto de péptido, en cambio, se refiere a la cantidad total pesada.

Para profundizar: HPLC y espectrometría de masas, Leer correctamente un certificado de análisis y Pureza e impurezas. En el área de laboratorio encontrará los certificados de análisis (COA) disponibles; donde todavía no hay ninguno publicado, figura «pendiente».

Almacenamiento y manipulación en el laboratorio

Liofilizado, Tesamorelin es bastante más estable que en disolución. A corto plazo bastan 2–8 °C; para periodos más largos se recomienda −20 °C, siempre en seco y protegido de la luz. Dos puntos de la secuencia merecen especial atención:

• Metionina 27: el oxígeno del aire y la luz favorecen la oxidación. Por ello, mantenga los viales abiertos solo brevemente.
• Residuos de asparagina y glutamina: la humedad y el calor favorecen la desamidación. Deje que el vial alcance la temperatura ambiente antes de abrirlo, para que no se deposite agua de condensación sobre el polvo.

Las sales de acetato de los péptidos suelen ser higroscópicas; por eso, pese con rapidez y con la menor humedad ambiental posible. Es preferible dividir las disoluciones en alícuotas que congelarlas y descongelarlas repetidamente. La guía Almacenar péptidos liofilizados recoge indicaciones generales.

Contexto de investigación

Tesamorelin se estudia en la investigación in vitro y preclínica sobre el receptor de GHRH, un receptor acoplado a proteínas G de clase B que señaliza a través de la vía del AMPc. Las cuestiones típicas son la unión al receptor y la transducción de señales en sistemas celulares que expresan el receptor, así como la comparación de análogos de GHRH completos y acortados. Para la química de péptidos, la molécula es además un caso modelo de acilación N-terminal como protección frente a exopeptidasas como la DPP-4.

Solo para investigación: aviso legal

GPeptides comercializa Tesamorelin exclusivamente como reactivo de laboratorio para la investigación in vitro. El producto no está destinado a su uso en o sobre el cuerpo humano o animal y no se ofrece como medicamento. GPeptides no facilita indicaciones sobre su aplicación ni sobre sus efectos; la analítica acredita la identidad y la pureza del reactivo, nada más. El precio y la disponibilidad figuran en la página de producto Tesamorelin, y los péptidos afines, en la categoría Péptidos GHRH & GHRP.